Comment T‐Streak (microbiologie)?

Afin d'éliminer le risque de contamination de la boîte de Pétri lors de l'inoculation de la surface de la gélose dans la boîte de Pétri, la boucle d'inoculation doit être stérilisée.

Dans la nature, les bactéries se trouvent sur pratiquement toutes les surfaces imaginables et existent malheureusement rarement dans des populations isolées contenant une espèce singulière de bactérie. Cela présente un défi intéressant au microbiologiste pour obtenir des colonies isolées de bactéries selon une méthode à la fois simple et rapide. La séquence à trois secteurs ou communément appelée «Strie en T» est une compétence de base, mais cruciale, utilisée quotidiennement par le microbiologiste pour isoler, identifier et étudier les colonies de bactéries.

Partie 1 sur 5: dessiner le t

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Retournez à l'arrière d'une boîte de Pétri stérile contenant de l'agar. Tracez une ligne commençant légèrement au-dessus du point central. Continuez à tracer la ligne jusqu'à ce que vous atteigniez le bord de la plaque arrière.
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Tracez une autre ligne en partant du côté gauche de la plaque arrière jusqu'à ce que vous atteigniez l'autre côté. Cette nouvelle ligne doit être perpendiculaire à la ligne d'origine, en la coupant au point de départ. La plaque arrière de la boîte de Pétri doit maintenant être divisée en trois secteurs, apparaissant comme un grand "T".
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Étiquetez la plaque arrière de la boîte de Pétri avec des informations de laboratoire pertinentes telles que vos initiales, la date, l'heure et la source de culture.

Partie 2 sur 5: stériliser la boucle d'inoculation

Afin d'éliminer le risque de contamination de la boîte de Pétri lors de l'inoculation de la surface de la gélose dans la boîte de Pétri, la boucle d'inoculation doit être stérilisée.

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Commencez par connecter le bec Bunsen à une source de combustible et allumez-le.
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Insérez la boucle dans la flamme à un angle vertical. L'objectif est d'avoir la boucle d'inoculation légèrement au-dessus du cône bleu intérieur de la flamme. Tenez-le là pendant plusieurs secondes.
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Retirez la boucle de la flamme. À ce stade, la boucle est stérile et extrêmement chaude.
- La boucle d'inoculation doit être refroidie, sinon la chaleur résiduelle tuera les bactéries prélevées sur la culture.
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Refroidir l'anse d'inoculation. Soulevez le couvercle de la boîte de Pétri juste assez pour insérer la boucle. Touchez le bord extérieur de la gélose nutritive. Un grésillement doit être entendu au premier contact. Continuez à tenir la boucle d'inoculation contre la surface pendant plusieurs secondes.
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Retirez la boucle d'inoculation de la boîte de Pétri. Évitez de toucher toute autre surface à ce stade, car cela recontaminerait l'anse d'inoculation.

Faites glisser légèrement la boucle d'inoculation sur la gélose nutritive vers le deuxième secteur.

Partie 3 sur 5: inoculer l'anse avec un bouillon de culture

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Tenir la boucle d'inoculation stérile. Ouvrez la source de votre culture telle que la culture du bouillon.
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Insérez la boucle dans la culture, en faisant tourbillonner le contenu pour assurer une distribution uniforme des bactéries à l'intérieur. Faites cela pendant plusieurs secondes.
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Retirez la boucle et récupérez l'échantillon d'origine.

Faites glisser légèrement la boucle d'inoculation à travers la gélose nutritive vers le troisième secteur.

Partie 4 sur 5: inoculation de l'anse avec une culture sur plaque

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Sélectionnez une colonie ou une section de l'échantillon.
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Retirer le couvercle de la plaque de gélose et gratter l'échantillon sélectionné avec la boucle d'inoculation.
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Remettez le couvercle de la plaque en place.

Partie 5 sur 5: inoculation de la gélose nutritive

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Soulevez le couvercle de la boîte de Pétri juste assez pour insérer la boucle. En commençant par le secteur supérieur du «T», faites glisser légèrement la boucle d'inoculation sur la surface de la gélose nutritive en zigzag. Il est important de rester dans la région dans laquelle vous inoculez actuellement.
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Re-stériliser la boucle d'inoculation maintenant que le premier secteur du «t» a été inoculé. Suivez la méthode décrite dans Stérilisation de la boucle d'inoculation. N'oubliez pas de refroidir l'anse d'ensemencement sur le bord de la gélose nutritive qui n'a pas été contaminée par la culture d'origine!
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Faites pivoter la boîte de Pétri de 90 degrés et soulevez le couvercle juste assez pour insérer la boucle.
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Commencez dans le premier secteur. Faites glisser légèrement la boucle d'inoculation sur la gélose nutritive vers le deuxième secteur.
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Continuez dans le deuxième secteur. Faites glisser légèrement la boucle d'inoculation sur la gélose nutritive en zigzag.
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Re-stériliser la boucle d'inoculation maintenant que le deuxième secteur du «t» a été inoculé. Suivez la méthode décrite dans Stérilisation de la boucle d'inoculation. N'oubliez pas de refroidir l'anse d'ensemencement sur le bord de la gélose nutritive qui n'a pas été contaminée par la culture d'origine!
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Faites pivoter la boîte de Pétri de 90 degrés et soulevez le couvercle juste assez pour insérer la boucle.
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Commencez dans le deuxième secteur. Faites glisser légèrement la boucle d'inoculation à travers la gélose nutritive vers le troisième secteur.
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Continuez dans le troisième secteur. Faites glisser légèrement la boucle d'inoculation sur la gélose nutritive en zigzag.

Choses dont vous aurez besoin

bec Bunsen
Allumettes
Culture mixte (ex. Escherichia coli & Serratia Marcescens)
Boucle d'inoculation
Boîtes de Pétri stériles contenant une gélose nutritive

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